HCV NS4B表达载体的构建及其对细胞凋亡的影响
Construction of expression vector of HCV NS4B and its effect on cell apoptosis
Abstract
目的 构建丙型肝炎病毒（HCV）2a型非结构蛋白4B（NS4B）的真核表达载体,并观察其对骨肉瘤细胞U2OS凋亡的影响。方法 以质粒PJFH1为模板,通过PCR反应扩增4目的基因片段,采用同源重组法与PCMV-tag2b载体相连,转化大肠杆菌感受态DH5α,筛选正确的克隆。以脂质体为介导转染U2OS细胞,通过Western blot检测NS4B蛋白的表达,免疫荧光检测细胞的凋亡。结果 构建pCMV-tag2b-NS4B重组质粒,经测序其与NCBI公布的序列完全一致,并可在U2OS细胞中表达,DAPI检测显示细胞凋亡率为（17.25±2.95）%,对照组凋亡率为（6.53±2.36）%。结论 成功构建NS4B的真核表达载体,并可在U2OS细胞中表达,诱导细胞凋亡。